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技術(shù)文章

液相色譜儀進(jìn)樣方式

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液相色譜儀進(jìn)樣方式
 

液相色譜儀的進(jìn)樣裝置要求密封性好,死體積小,重復性好,保證中心進(jìn)樣,進(jìn)樣時(shí)對色譜系統的壓力和流量影響小。HPLC進(jìn)樣方式有隔膜進(jìn)樣、停流進(jìn)樣、閥進(jìn)樣和自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣等。

一、隔膜進(jìn)樣:

        用微量注射器將樣品注入專(zhuān)門(mén)設計的與HPLC色譜柱相連的進(jìn)樣頭內,可把樣品直接送到色譜柱填充床的中心,死體積幾乎等于零,可獲得*柱效,且價(jià)格便宜,操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上);隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應,使進(jìn)樣重復性只能達到1%2%;能耐各種溶劑的橡皮不易找到,常規分析使用受到限制。

二、停流進(jìn)樣:

        可避免在高壓下進(jìn)樣。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新啟動(dòng)時(shí)往往會(huì )出現鬼峰;保留時(shí)間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中,效果較好。

三、閥進(jìn)樣:

        HPLC分析常用六通閥,其關(guān)鍵部件由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在,柱效低于隔膜進(jìn)樣(約下降5%10%),但耐高壓(3540MPa),進(jìn)樣量準確,重復性好(0.5%),操作方便。

  1、六通閥進(jìn)樣方式:

1)部分裝液法進(jìn)樣:

        進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量應不大于定量環(huán)體積的50%(zui多75%),要求每次進(jìn)樣體積準確、相同。

        此法進(jìn)樣的準確度和重復性決定于注射器取樣的熟練程度,而且易產(chǎn)生由進(jìn)樣引起的峰展寬。

2)*裝液法進(jìn)樣:

        進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量應不小于定量環(huán)體積的510 倍(zui少3倍),這樣才能*置換定量環(huán)內的流動(dòng)相,消除管壁效應,確保進(jìn)樣的準確度和重復性。

  2、六通閥使用和維護注意事項:

1)樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過(guò)濾,以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

2)轉動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,更不能停留在中間位置。否則流動(dòng)相受阻,使泵內壓力劇增,甚至超過(guò)泵的zui大壓力,再轉到進(jìn)樣位時(shí),過(guò)高的壓力將使色譜柱損壞。

3)為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次分析結束后應沖洗進(jìn)樣閥。通??捎盟疀_洗,或先用能溶解樣品的溶劑沖洗,再用水沖洗。

四、自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣:

        用于大量樣品的常規分析。

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